Lambda-HindIII digestを用いたDNAの簡易定量
実験メモ#1
分光光度計が無くてもLambda-HindIII digest と電気泳動セットとUVイルミネータがあれば、簡易的にDNAの定量ができます。
Frag.# | bp | % | ng (Lambda-HindIII digest 1 micro gあたり) |
1 | 23130 | 47.7 | 477 |
2 | 9416 | 19.4 | 194 |
3 | 6557 | 13.5 | 135 |
4 | 4361 | 9.0 | 90 |
5 | 2322 | 4.8 | 48 |
6 | 2027 | 4.2 | 42 |
7 | 564 | 1.2 | 12 |
8 | 125 | 0.2 | 2 |
total | 48502 | 100 | 1000 |
濃度を調べたいDNA溶液をLambda-HindIII digest 1 micro gと同時に0.6〜2%寒天ゲルで電気泳動(100 V, 20〜30分)する。FastGreenなどの色素で染色してから、UVイルミネーターを使って観察してバンドの濃さを比較する。
たとえば、DNA溶液のバンドがLambda-HindIII digest Frag.#4と同じくらいだったら、その溶液の中には90 ngぐらいのDNAが含まれていたと概算できる。
泳動したDNA溶液の量が10 micro Lだったら、90e-9 (g) / 10e-6 (L) = 9e-3 (g/L)。単位を変えると、9 micro g / mL(ぐらい)。
ほなまた
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